马铃薯转录因子基因StWRKY57的克隆及其蛋白原核表达

作者：胡月清; 王若仲; 黄志刚; 萧浪涛^*

来源：华北农学报, 2021, 36(01): 10-17.

• 马铃薯
• StWRKY57
• GST标签
• 序列分析
• 原核表达

为了研究马铃薯WRKY57基因(PGSC transcript number PGSC0003DMT400072958)功能,通过RT-PCR克隆得到马铃薯耐旱品种PB06的StWRKY57基因cDNA序列,命名为StWRKY57-PB。利用生物信息学方法对其序列特征进行了分析;以pGEX-KG为基本骨架,构建了StWRKY57-PB蛋白的原核表达载体并在大肠杆菌中进行了表达和纯化分析。结果表明,StWRKY57-PB基因开放阅读框(ORF)长981 bp,编码蛋白属于WRKY转录因子家族Ⅱc类,含326个氨基酸残基,含有WRKY结构域(WRKYGQK)和一个类锌指结构基序(C-X4-C-X23-H-X1-H)。序列比对及构建系统发育树结果表明,它与马铃薯基因组数据库及NCBI公布的WRKY57(XP006348711.1)有4个氨基酸的差异,与番茄WRKY57分子距离较近,相似性为93%,与拟南芥WRKY57亲缘关系较远,相似性为57%。二级结构预测发现,StWRKY57-PB所编码蛋白由延伸链、α螺旋、β折叠和不规则卷曲组成,四者比例分别为13.50%,16.56%,7.98%,61.96%。在0.5 mmol/L IPTG诱导下,该蛋白质在3种大肠杆菌表达菌株BL21、Rosetta和Tuner中稳定表达,利用GST亲和树脂分离纯化了GST-StWRKY57-PB融合蛋白,Western Blot验证了蛋白质的表达和纯化。对进一步确定该蛋白质的体外活性及生物学功能具有重要意义。

• 单位
  生命科学与资源环境学院; 宜春学院; 湖南农业大学