猪嵴病毒RPA快速诊断方法的建立和应用

作者：刘占旭; 刘新生; 方玉珍; 周鹏; 张巧玲; 张丽萍; 董昭良; 张永光; 杜晓华^*; 王永录^*

来源：中国兽医科学, 2018, 48(09): 1073-1079.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0135

• 重组酶聚合酶扩增
• 猪嵴病毒
• 快速检测

根据Gen Bank中公布的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)基因组序列,设计并合成特异性引物,构建阳性质粒标准品,以阳性标准品为模板建立猪嵴病毒的重组酶聚合酶扩增(RPA)快速检测方法,并对此方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示,以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒为模板时均未检测到特异性扩增条带,表明该方法具有良好的特异性;用3.36×107、3.36×106和3.36×105copies/L三个不同浓度的质粒标准品进行重复试验,均能扩增出特异性条带,表明该方法具有良好的重复性。10倍梯度稀释质粒标准品,此方法检测的最低限度为3.36×102copies/L的质粒DNA,表明此方法具有良好的敏感性。利用该方法对208份临床猪粪便样品进行了检测,结果显示,猪嵴病毒阳性率为73.1%,明显高于常规RT-PCR的46.6%,两种方法的符合率为90.2%。上述结果表明,本研究建立的RPA方法可应用于猪嵴病毒的临床诊断及快速检测。

• 单位
  甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室