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摘要
目的研究环状RNA(circRNA)circOMA1在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及其对AML细胞系人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)增殖和凋亡的影响及机制。方法收集AML患儿初诊时和完全缓解后骨髓样本各14例作为初诊组及缓解组, 并纳入同一时期同医院10例非恶性血液病患儿骨髓样本作为对照组。采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测AML临床样本中和THP-1细胞系中circOMA1、miR-145和骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)mRNA的表达。转染THP-1细胞构建分组, 单独转染circOMA1的细胞(circOMA1高表达组)采用转染pcDNA3.1空载体的细胞作为对照(pcDNA3.1对照组);circOMA1和miR-145共转染的细胞(circOMA1+miR-145组)采用pcDNA3.1和miR-NC共转染的细胞作为对照(pcDNA3.1+miR-NC组、circOMA1+miR-NC组)。采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测circOMA1及miR-145对THP-1细胞增殖的作用, 采用流式细胞技术检测circOMA1及miR-145对THP-1细胞凋亡的影响, 采用Western blot法检测circOMA1及miR-145对MYC蛋白表达的影响。组间比较采用独立样本t检验或配对样本t检验分析, 相关性采用Pearson相关性分析。结果初诊组的circOMA1表达水平(4.408±3.607)高于对照组(0.998±0.560), 差异有统计学意义(t=2.946, P<0.01);缓解组circOMA1表达水平(1.582±0.950)低于初诊组, 差异有统计学意义(t=3.628, P<0.01)。THP-1细胞实验显示, 与pcDNA3.1对照组相比, circOMA1高表达组miR-145的表达降低(t=4.21, P<0.05), 72 h和96 h细胞增殖增强(t=5.46、7.40, 均P<0.05), 细胞凋亡被抑制(t=6.44, P<0.01)。circOMA1+miR-NC组MYC蛋白的表达高于pcDNA3.1+miR-NC组(t=5.72, P<0.01), circOMA1+miR-145组的MYC蛋白表达低于circOMA1+miR-NC组(t=4.56, P<0.05);在72 h和96 h时, circOMA1+miR-NC组的细胞增殖水平均高于pcDNA3.1+miR-NC组(t=5.77、7.30, 均P<0.05), circOMA1+miR-145组的细胞增殖水平均低于circOMA1+miR-NC组(t=4.66、6.17, 均P<0.05);circOMA1+miR-145组细胞凋亡率高于circOMA1+miR-NC组(t=4.25, P<0.05)。临床样本检测发现, circOMA1的表达与miR-145的表达呈负相关(r=-0.62, P=0.016), 与MYC基因的表达呈正相关(r=0.64, P=0.013)。结论 circOMA1在儿童AML中表达升高, 并可通过miR-145/MYC途径促进AML细胞增殖, 抑制凋亡, 有望为AML的治疗和诊断提供理论依据。
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单位生命科学学院; 中国科学院; 广州市妇女儿童医疗中心; 广州医科大学
