生姜蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达

作者：卢瑛

来源：食品安全导刊, 2021, (23): 75-78.

DOI：10.16043/j.cnki.cfs.2021.23.070

• 莱芜生姜
• 生姜蛋白酶
• 克隆
• 原核细胞
• 表达

提取莱芜生姜总RNA,采用RT-PCR技术扩增出生姜蛋白酶(Ginger protease)基因GP2和GP3,经序列比对,发现莱芜生姜蛋白酶基因GP2在945位的碱基与Gene bank中生姜蛋白酶的序列GP2b(GI:57118006)有差异,GP3在451、700和804这3个位置的碱基与GP3b(GI:57118011)有差异,在翻译后的氨基酸也不同,表明了不同生姜品种生姜蛋白酶基因的多样性。将克隆的GP2片段GPII重组到带有His-tag的原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET-GPII。将重组pET-GPII转化到大肠杆菌BL21(DE3)中构建工程菌株,工程菌株用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,在诱导6 h,IPTG浓度为0.1 mmol/L时,重组GPII表达量最高。SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明蛋白大小约为21 kDa。该实验结果表明生姜蛋白酶能够在原核表达系统进行大量表达,为生姜蛋白酶工程化生产奠定了基础。

• 单位
  莱芜职业技术学院