siRNA-Piezo1通过ERK1/2信号通路抑制滑膜细胞增殖和炎性因子表达的相关机制

作者：何珊; 王颖芳; 杜红卫; 周勇伟; 李晓飞^*; 薛静^*

来源：暨南大学学报(自然科学与医学版), 2020, 41(05): 434-443.

DOI：10.11778/j.jdxb.2020.05.008

• 机械牵张应力
• Piezo1蛋白
• 细胞增殖
• 炎性因子

目的:探究siRNA-Piezo1通过抑制Piezo1表达、阻断ERK1/2信号通路后,对滑膜细胞增殖情况和炎性因子表达的影响及相关机制.方法:以类风湿关节炎(RA)患者和截肢患者为研究对象,手术过程中获取滑膜组织.利用免疫组化染色法检测滑膜组织中Piezo1蛋白的表达量.分离并培养人关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLS),通过Flexcell 4000 T设备构建体外力学RAFLS细胞模型,根据干预情况分成空白对照组,siRNA-Piezo1组、siRNA-Piezo1+PD98059组、24 h应力组、siRNA-Piezo1+24 h应力组、siRNA-Piezo1+PD98059+24 h应力组、48 h应力组、siRNA-Piezo1+48 h应力组和siRNA-Piezo1+PD98059+48 h应力组.RT-PCR方法检测Piezo1和EKR1/2的变化,CCK-8试剂盒检测增殖情况,ELISA方法观察关节液和细胞上清液中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达.结果:免疫组化的结果显示,RA患者滑膜组织中Piezo1蛋白的表达量要明显高于正常对照者(P<0.05).荧光显微镜下观察,慢病毒转染RAFLS的效率大于90%,RT-PCR结果显示,siRNA-Piezo1干扰序列转染RAFLS后,Piezo1 mRNA的表达量明显降低(P<0.05).CCK-8测定结果显示,24 h应力组和48 h应力组RAFLS细胞的增殖率均明显高于空白对照组(P<0.05);siRNA-Piezo1+24 h应力组和siRNA-Piezo1+48 h应力组RAFLS细胞的增殖率分别明显低于24 h应力组和48 h应力组(P<0.05);siRNA-Piezo1+PD98059+24 h应力组和siRNA-Piezo1+PD98059+48 h应力组RAFLS的细胞增殖率分别明显低于24 h应力组和48 h应力组(P<0.05)及siRNA-Piezo1+24 h应力组和siRNA-Piezo1+48 h应力组(P<0.05).ELISA测定结果显示,24 h应力组和48 h应力组细胞上清液的IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量均明显高于空白对照组(P<0.05);siRNA-Piezo1+24 h应力组和siRNA-Piezo1+48 h应力组细胞上清液的IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量分别明显低于24 h应力组和48 h应力组(P<0.05);siRNA-Piezo1+PD98059+24 h应力组和siRNA-Piezo1+PD98059+48 h应力组细胞上清液的IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量分别明显低于siRNA-Piezo1+24 h应力组和siRNA-Piezo1+PD98059+48 h应力组(P<0.05).RT-PCR测定结果显示,24 h应力组和48 h应力组细胞Piezo1和ERK1/2的mRNA的相对表达量均明显高于空白对照组(P<0.05);siRNA-Piezo1+PD98059+24 h应力组和siRNA-Piezo1+PD98059+48 h应力组细胞ERK1/2的mRNA的相对表达量分别明显低于siRNA-Piezo1+24 h应力组和siRNA-Piezo1+48 h应力组(P<0.05).结论:ERK1/2可能为Piezo1的下游信号分子,通过ERK1/2信号通路阻断力学信号传导,可抑制RAFLS细胞增殖和炎性因子的释放.

• 单位
  浙江大学