miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用

作者：张议心; 王利新; 徐广贤; 杨丽; 赵瑾; 郭文伟; 刘新兰

来源：基础医学与临床, 2016, 36(04): 445-450.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2016.04.005

• miR-1247-5p
• TGF-β信号通路
• Smad2基因
• 肿瘤

目的利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用。方法合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3’非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中。将测序鉴定阳性的report-Smad2 3’-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平。结果成功构建report-Smad2 3’-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P<0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P<0.05)。结论证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院