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摘要
目的建立甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)-铜配合物(Mb-Cu)模拟超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的邻苯三酚自氧化体系分析方法。方法利用HP 20大孔树脂从甲基弯菌IMV301l发酵液中分离纯化得到Mb,制备Mb-Cu测定其具有的SOD活性,利用紫外光谱分析对SOD邻苯三酚测活法进行系统研究。考察缓冲液浓度、邻苯三酚浓度、Mb-Cu浓度、EDTA-Na2浓度、pH值和温度等对Mb-Cu模拟SOD活性的影响。结果在Mb-Cu浓度为0.8 mg/L,Tris-HAC缓冲溶液为0.05 mol/L(其中缓冲溶液的pH值为8.2、EDTA-Na2的浓度为2 mmol/L),邻苯三酚浓度为0.363 mmol/L,温度为20℃时,邻苯三酚的自氧化速率相对较低,此时Mb-Cu对超氧阴离子自由基(O2-.)的抑制率较高,以此建立Mb-Cu模拟SOD活性的邻苯三酚自氧化分析方法。发现Mb-Cu符合影响生物催化剂条件的一般规律,但比生物酶具有更高的热稳定性。结论Mb-Cu可作为清除O2-.的SOD模拟酶,本试验建立的分析条件是最佳反应体系。
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单位羰基合成与选择氧化国家重点实验室; 哈尔滨商业大学; 中国科学院兰州化学物理研究所
