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摘要
目的建立一种表皮生长因子受体(EGFR)基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值。方法以EGFR基因热点突变区域19、21外显子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品,以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立EGFR基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估。结果成功构建了EGFR基因19、21外显子野生型、突变型质粒。建立了EGFR基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高(101 copy/μL),重复性好(19、21外显子实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1.42%、3.52%和0.97%、2.44%)。该法与传统Sanger测序法同时检测20份临床样品,结果完全相符。结论成功建立了可用于临床样品检测的EGFR基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法。
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