HILIC-MS/MS法鉴别肝素和硫酸乙酰肝素

作者：刘冬科; 王凤山^*

来源：山东大学学报(医学版), 2021, 59(03): 41-47.

• 肝素
• 硫酸乙酰肝素
• 亲水相互作用色谱-质谱
• 双糖
• 鉴别

目的建立亲水相互作用色谱-三重四极杆质谱法(HILIC-MS/MS)同时测定肝素及硫酸乙酰肝素经肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ酶切后产生的双糖含量,为肝素及硫酸乙酰肝素的鉴别提供方法和数据参考。方法采用PC HILIC色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),以10 mmol/L乙酸铵-水溶液(A)、10 mmol/L乙酸铵-90%乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速0.9 mL/min,柱温40℃,进样量10μL,采用电喷雾电离源、负离子多反应检测模式对肝素及硫酸乙酰肝素酶切后产生的8种双糖进行定量,比较二者的差异。结果所测成分在测定摩尔浓度范围内线性关系良好(r2>0.996 0),平均加样回收率为90.34%～99.62%,RSD为4.7%～6.7%,样品测定结果显示肝素与硫酸乙酰肝素双糖组成及比例差异明显。肝素中占比最大的双糖为ΔUA2S-GlcNS6S (TriS),约69.8%;硫酸乙酰肝素中占比最大的双糖为ΔUA-GlcNAc (0S),约51.0%。结论该法灵敏度高、稳定性好,简单快捷、准确可靠,可作为肝素与硫酸乙酰肝素的鉴别方法之一。

• 单位
  山东大学