人血栓调节蛋白基因编码片段的克隆及在真核细胞中的表达

作者：戴毅; 陈开; 邹琳; 张雪梅; 乔正荣; 时德

来源：中国普外基础与临床杂志, 2005, (06): 51-54.

• 血栓调节蛋白
• 真核细胞
• 重组质粒 Thrombomodulin Eukaryotic cell Recombinant plasmid

目的构建人血栓调节蛋白(hTM)基因真核表达质粒,并导入两种真核细胞[非洲绿猴肾母细胞(COS-7细胞)和脐静脉内皮细胞(HUVECs)]中表达,为临床血栓病的基因治疗提供实验依据和物质基础。方法采用PCR法扩增hTM基因的表达片段,HindⅢ+EcoRⅠ酶切后与pcDNA3.1(+)/neo质粒连接成pcDNA3.1/hTM。经鉴定确认后,由阳离子脂质体包裹转染COS-7细胞及HUVECs,RT-PCR和免疫组化法分别检测转染后细胞hTM的mRNA及蛋白的表达。结果双酶切及测序鉴定均证实hTM基因表达片段被成功克隆,pcDNA3.1/hTM经脂质体介导能有效地转染COS-7细胞和HUVECV...

• 单位
  川北医学院附属医院; 重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院