华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定

作者：谢红艳; 胡旭初; 徐劲; 吕刚; 陈守义; 魏全德; 李艳文; 吴忠道; 余新炳

来源：中国人兽共患病学报, 2006, 22(06): 561-564+593.

DOI：10.3969/j.issn.1002-2694.2006.06.019

• 华支睾吸虫
• Rho GTPase
• 基因克隆
• 原核表达

目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchissinensis)的RhoGTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定。方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的RhoGTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达。表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和蛋白印迹(Westernblotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化。结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa。PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-RhoGTPase构建成功。SDS PAGE结果表明RhoGTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达,重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别,表明其具有免疫反应性。亲和层析获得了高纯度的蛋白。结论华支睾吸虫的RhoGTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

• 单位
  中山大学; 基础医学院