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摘要
目的 评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在小鼠体内的毒性。方法 (1)急性毒性研究中，40只C57BL/6N小鼠随机分为2组，分别为溶媒组和受试物组，单次尾静脉注射后，进行连续15 d临床症状观察、体重和摄食量测定，于第15天剖检。(2)长期毒性研究中，440只小鼠随机分为4组，分别设置溶媒组，受试物低剂量组(1×1013 vg·kg-1)、中剂量组(5×1013 vg·kg-1)和高剂量组(1.5×1014 vg·kg-1)，单次尾静脉注射后，对动物体重、摄食量、血液学、血清生化、免疫毒性及免疫原性等毒性指标进行测定。给药后4周和6个月时解剖，动物进行组织病理学检查，并在2、4周，3、6个月采用q PCR的方法检测GC304在动物各个脏器的分布和表达情况。结果 (1)急性毒性研究中，动物临床症状、体重、摄食量未见异常，未见与GC304相关的大体病理学改变。(2)长期毒性研究中，动物临床症状、体重、摄食量、细胞因子和T淋巴细胞亚群未见与GC304相关的明显异常。GC304能够降低血浆中甘油三酯以及与抗药抗体相关的白蛋白/球蛋白比值下降，能够诱导抗AAV5结合抗体和中和抗体的产生，并持续至给药后6个月。给予GC304后，未检测到抗脂蛋白脂肪酶(LPL)抗体。组织病理学结果显示，小鼠给药后4周，注射部位出现与药物相关的炎性细胞浸润，至给药后6个月可见恢复。与药物相关的改变为脾脏生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多、腹股沟淋巴结生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多。qPCR检测结果显示，GC304在小鼠外周血及脏器广泛分布和表达，但在肝脏中分布和表达显著高于其他脏器。结论 C57BL/6N小鼠单次静脉给予GC304后，主要在肝脏中表达和分布，并且动物耐受性良好，未见明显毒性反应，为该药物进入临床试验提供参考。
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单位中国食品药品检定研究院
