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摘要
目的 制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法 以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能分泌B7-2 McAb的杂交瘤细胞株。采用Ig亚类鉴定试纸条、抗原位点竞争抑制试验、效价的测定及细胞膜型分子的识别作用对McAb进行生物学特性的分析。通过小鼠诱生腹水法制备McAb并经Protein G亲和层析法进行纯化。以天然高表达B7-2分子的多发性骨髓瘤细胞8266为观察对象,加入McAb共同孵育,流式细胞仪(FCM)检测其对细胞表面死亡相关分子Fas及FasL的诱导作用。结果 成功获得一株B7-2 McAb,标记为12G4,其重链为IgG2b,轻链为κ。12G4 McAb的效价为0.1 μg/5×105个细胞,纯化后得到腹水型抗体的含量为1.61 mg/ml。FCM结果显示,12G4 McAb能很好地识别细胞膜型分子,其与8266细胞的阳性结合率为89.6%,当20 μg/ml 12G4 McAb与细胞孵育12 h,细胞表面Fas分子的平均值(mean)开始上调,48 h达到最大值(62 575.8),与IgG对照组(57 135.4)比较差异有统计学意义(P<0.05)。20 μg/ml 12G4与细胞孵育12 h,细胞表面FasL分子的表达也开始上调,48 h达到最大值(7.98%),与IgG对照组(1.10%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 成功制备了B7-2 McAb,其能诱导表达该分子的肿瘤细胞表面的部分死亡相关分子的表达。
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