P6BMP2的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作者：胡敏进; 华子春

来源：东南大学学报(医学版), 2007, 26(02): 124-127.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6264.2007.02.012

• 骨形态发生蛋白
• P6
• P6BMP2
• 大肠杆菌
• 胶原蛋白
• 表达

目的:在大肠杆菌中克隆和表达骨形态发生蛋白2(BMP2)的变体P6BMP2并初步纯化。方法:根据P6肽的氨基酸序列,按照大肠杆菌偏爱密码子将P6肽的核酸序列设计在5′端引物,通过PCR方法合成P6BMP2基因,并将其克隆到大肠杆菌表达质粒pALEX中,经NcoⅠ、XhoⅠ双酶切和DNA序列测定验证。结果:通过双酶切和DNA序列分析,证实获得的基因片段与我们期望的相符合,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得表达。表达产物经超声破碎和Heparin Sepharo-se TM6 Fast Flow亲和层析纯化,获得重组蛋白。结论:构建了P6BMP2的表达质粒,获得P6BMP2的表达并建立了纯化方式,为P6BMP2的深入研究和应用奠定了坚实的基础。

• 单位
  医药生物技术国家重点实验室; 南京大学