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摘要
目的探讨环状RNA hsacirc0008898对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤形成的影响和分子机制。方法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)和蛋白质印迹法检测OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞和人正常口腔角质细胞(normal oral keratinocytes, NOK)中环状RNAhsacirc0008898、Ras同源物基因家族成员A(ras homolog gene family member A, RHOA)及微RNA miR-197-5p的表达水平。在CAL27和SCC-25细胞中分别转染si-hsacirc0008898#1(敲低1组)、si-hsacirc0008898#2(敲低2组)、hsacirc0008898(circ过表达组)及空白质粒(circ空白组);在敲低1组细胞中, 再分别转染miR-197-5p抑制物(抑制组)和空白质粒(抑制对照组)。在CAL27和SCC-25细胞中分别转染miR-197-5p模拟物(miR过表达组)及空白质粒(miR空白组);在miR过表达组细胞中, 再分别转染hsacirc0008898载体(共转染1组)、RHOA载体(共转染2组)和空白质粒(共转染对照组)。细胞计数、克隆形成、流式细胞术、Transwell及划痕实验分别检测细胞增殖活力、克隆能力、细胞周期分布、细胞侵袭及迁移能力。将10只裸鼠平均分为2组, 每组5只, 经腋下皮下分别注射转染空白质粒(对照组)和转染sh-hsacirc0008898的SCC-25细胞(敲除组), 检测肿瘤体积和质量。结果 OSCC组织中hsacirc0008898和RHOA的表达量(分别为2.89±0.72和2.62±0.21)均显著高于癌旁组织(分别为1.00±0.48 和1.00±0.11), miR-197-5p表达量(0.46±0.24)显著低于癌旁组织(1.00±0.42)(P<0.05)。与NOK相比, CAL27和SCC-25细胞中hsacirc0008898、RHOA表达均显著升高, miR-197-5p表达均显著降低(P<0.05)。敲低1组和敲低2组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数均显著低于circ空白组, G1期细胞比例均显著增加(P<0.05)。与抑制对照组相比, 抑制组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、迁移面积和侵袭细胞数均显著升高, G1期细胞比例显著降低(P<0.05)。与miR空白组相比, miR过表达组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数均显著降低, G1期细胞比例显著增加(P<0.05)。与共转染对照组相比, 共转染2组CAL27和SCC-25的细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数均显著增加, G1期细胞比例显著降低(P<0.05)。敲除组裸鼠移植瘤体积[(660.4±67.8) mm3]和质量[(0.60±0.06) g]均显著低于对照组[分别为(1 210.4±198.9) mm3和(1.00±0.12) g](P<0.05)。结论敲减hsacirc0008898表达通过调控miR-197-5p/RHOA轴抑制OSCC细胞增殖、克隆、迁移及侵袭能力, 诱导细胞G1期阻滞, 抑制裸鼠成瘤。
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