白纹伊蚊nAChR-α5基因RNA干扰体系的构建及其在双氧木脂素A抗性中的作用

作者：任芸皓; 郝焕焕; 左亚运; 裴雅琨; 胡兆农^*

来源：昆虫学报, 2023, 66(05): 676-684.

DOI：10.16380/j.kcxb.2023.05.008

• 白纹伊蚊
• 双氧木脂素A
• nAChR-α5
• RNAi技术
• 壳聚糖/dsRNA纳米颗粒

【目的】探究白纹伊蚊Aedes albopictus烟碱型乙酰胆碱受体α5(nicotinic acetylcholine receptor α5, nAChR-α5)亚基是否是双氧木脂素A(haedoxan A, HA)潜在的作用靶标，为白纹伊蚊的有效防治提供参考。【方法】利用PCR克隆白纹伊蚊nAChR-α5编码区(coding sequence, CDS)序列并构建系统发育树；利用RT-qPCR检测白纹伊蚊nAChR-α5在不同发育阶段(1-4龄幼虫、蛹和未吸血的雌成蚊)的表达量；利用壳聚糖/dsRNA纳米颗粒介导RNAi技术敲减白纹伊蚊2龄幼虫nAChR-α5的表达量；生物测定RNAi后的白纹伊蚊3龄幼虫对HA[LC30(0.3 mg/L)和LC50(0.4 mg/L)]的敏感性。【结果】白纹伊蚊nAChR-α5的CDS长1 296 bp,编码431个氨基酸，具有nAChR的典型半胱氨酸环(Cys-loop)。蛋白序列比对和系统发育树表明白纹伊蚊nAChR-α5与埃及伊蚊A.aegypti的nAChR-α5同源性最高，亲缘关系最近。nAChR-α5在白纹伊蚊4龄幼虫中的表达量最高，其次是在雌成虫中的；饲喂壳聚糖/dsnAChR-α5纳米颗粒(dsRNA浓度为0.3%w/w)后24 h时对白纹伊蚊2龄幼虫nAChR-α5的干扰效率最高，达到70%。生测结果表明，与饲喂不含dsRNA饲料的空白对照和饲喂含有壳聚糖/dsGFP纳米颗粒饲料的阴性对照相比，在LC30和LC50的HA处理下，敲减nAChR-α5组的白纹伊蚊3龄幼虫死亡率显著下降9.89%～15.45%,表明敲减nAChR-α5使白纹伊蚊对HA的敏感性显著降低。【结论】白纹伊蚊nAChR-α5可能是HA潜在的作用靶标之一，HA可能通过干扰白纹伊蚊nAChR-α5的功能进而影响神经兴奋传导。

• 单位
  西北农林科技大学