酵母双杂交技术筛选NECL1胞内区的结合蛋白

作者：李晨; 陈涛; 阴彬; 龚燕华

来源：基础医学与临床, 2009, (02): 119-123.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2009.02.001

• 酵母双杂交
• NECL1
• 相互作用蛋白 yeast two-hybrid
• interaction protein

目的筛选人源膜表面黏附分子NECL1蛋白胞内区相互作用蛋白。方法构建含人NECL1蛋白胞内区氨基酸编码序列的诱饵质粒pGBKT7N-ECL1C,对人胎脑cDNA文库进行酵母双杂交筛选。用GST pu ll down实验进行体外蛋白相互作用的验证。结果酵母双杂交阳性克隆测序后显示共存在9段不同序列(存在重复克隆)。比对氨基酸序列得到5个可能相互作用蛋白。通过GST pu ll down实验验证了其中两个蛋白与NECL1胞内区的相互作用。结论应用酵母双杂交系统,获得了一些候选的NECL1胞内区相互作用蛋白。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所