多房棘球蚴抗原亮氨酸氨基肽酶的原核表达纯化及酶活性分析

作者：王蕾; 杨宝良; 魏威; 周培; 刘海生; 李润乐^*; 汤锋^*

来源：中国高原医学与生物学杂志, 2020, 41(04): 260-265.

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2020.04.008

• 多房棘球蚴
• LAP
• 原核表达
• Leu-pNA
• 酶活性

目的构建多房棘球蚴抗原亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase, LAP)原核表达系统,并做纯化及最佳酶活性条件分析,为后续作用机制研究奠定基础。方法利用OptimumTM Codon软件对LAP编码序列进行优化后合成目的基因,连接入表达载体pCzn1后转化入大肠杆菌BL-21菌株,在发酵过程中加入IPTG诱导目的蛋白表达后,通过Ni柱亲和纯化获得高纯度重组目的蛋白LAP。以亮氨酸对硝基苯胺(Leu-pNA)为底物测定LAP酶活性,观察酶活性的最适pH和温度,以及不同金属离子对其酶活性的影响。结果基因测序和酶切鉴定显示pCzn1-LAP质粒构建成功,通过Ni柱亲和纯化得到一个大小约为57 KD的蛋白。当pH为9.0、温度为60℃时LAP酶活性最强;金属离子对LAP酶活性影响的小大顺序为Co2+>Zn2+>Ca2+>Mn2+>Mg2+>Ba2+>K+。结论本研究成功构建LAP原核表达系统,表达和纯化了LAP蛋白,获得了酶活性最强时的基础条件,为研发抗寄生虫药物及探究LAP在多房棘球蚴感染过程的作用机制奠定了基础。

• 单位
  青海省红十字医院; 青海大学