摘要
目的观察葛根素对人胆管癌(RBE)细胞增殖和凋亡的影响,及其相关基因表达量变化。方法RBE细胞培养后,使用不同浓度(0、100、250、500、1000、1 500μg/ml)的葛根素处理细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;(500、1 000μg/ml)葛根素处理RBE细胞,流式细胞学技术(FCM)检测细胞凋亡;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)基因的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果MTT法细胞活力检测显示高浓度葛根素(500、1 000、1 500μg/ml)以时间-剂量依赖的方式抑制RBE细胞的增殖,12h抑制率[(8.14±1.85)%、(12.57±3.10)%、(18.26±2.74)%,P=0.000、0.005、0.003],24 h抑制率[(22.38±2.77)%、(29.14±3.85)%、(37.43±2.11)%,P=0.005、0.007、0.002],48 h抑制率[(35.47±3.75)%、(40.81±2.52)%、(52.29±3.98)%,P=0.007、0.000、0.002]差异均有统计学意义;(500、1 000μg/ml)葛根素处理RBE细胞24 h后,RBE细胞凋亡率[(14.21±2.53)%、(22.87±2.74)%]较对照组[(3.246±2.25)%]明显升高,差异有统计学意义(P=0.013、0.008);凋亡基因bax表达量与对照组(0.98±0.04)比较升高[(2.37±0.17)、(3.78±0.41)倍,P=0.005、0.003],bcl-2表达量与对照组(0.99±0.03)比较下降(1.57±0.14、2.86±0.55)倍(P=0.002、0.008),差异均有统计学意义;活化半胱酰胺天冬氨酸特异性蛋白酶(Cleaved-caspase)-8、CleavedCaspase-9蛋白及bax蛋白表达水平升高(P=0.015、0.003、0.008),bcl-2蛋白表达水平降低(P=0.021),差异均有统计学意义。结论葛根素具有抑制RBE细胞增殖,促进其凋亡的作用。
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单位河南省人民医院; 锦州医科大学