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摘要
目的 基于网络药理学预测益肺散结方治疗肺腺癌的潜在作用机制，并通过体外细胞实验对关键信号通路之一Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)/血管内皮生长因子（VEGF）信号通路进行实验验证。方法 利用中药系统药理数据库（TCMSP）筛选益肺散结方的主要活性成分和潜在作用靶点。通过人类基因数据库（GeneCards）和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）检索获取肺腺癌主要靶点。运用韦恩图获取两者的交集靶点，通过Cytoscape3.7.2进行拓扑学分析，并建立中药-活性成分-靶点网络图。采用蛋白质相互作用平台（STRING）与Cytoscape3.7.2软件构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络。应用Metascape数据库进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。借助Vina 1.2.3软件进行分子对接验证。通过CCK-8法检测益肺散结方对细胞活性的影响，细胞划痕实验观察对细胞迁移的影响，Western blot法检测p-STAT3、STAT3、p-JAK2、JAK2、VEGF-A表达。结果 获取益肺散结方活性成分94种，相关药物靶点329个，肺腺癌靶点1358个，二者交集150个。PPI网络可视化分析显示，益肺散结方治疗肺腺癌的潜在关键靶点为：蛋白激酶B1(AKT1)、β-肌动蛋白（ACTB）、抑癌基因P53(TP53)、血清白蛋白（ALB）、caspase-3(CASP3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。KEGG富集分析筛选了138条相关信号通路，显示JAK/STAT信号通路可能在益肺散结方治疗肺腺癌的过程中起到关键作用。分子对接结果表明槲皮素、木犀草素、熊果酸与JAK2、STAT3之间均有较好的结合活性。细胞实验表明，与空白组比较，益肺散结方可显著抑制A549细胞活性（P<0.01），抑制A549细胞迁移（P<0.01），同时能降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、VEGF-A蛋白表达（P<0.05），此外，JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin可逆转益肺散结方对A549相关蛋白表达的影响（P<0.05）。结论 益肺散结方治疗肺腺癌具有多成分、多靶点、多通路的特点，其作用机制可能与下调p-JAK2、p-STAT3、VEGF-A蛋白的表达，进而抑制细胞增殖和迁移有关。
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