应用抑制性消减杂交技术克隆筛选丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2反式激活基因

作者：黄燕萍; 张树林; 成军; 张黎颖; 郭江; 杨瑗; 戴久增; 刘妍; 王琳; 蔺淑梅; 高学松

来源：中西医结合肝病杂志, 2005, (06): 337-339.

DOI：10.3969/j.issn.1005-0264.2005.06.006

• 丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2
• 反式激活
• 抑制性消减杂交 HCV F Binding Protein 2
• Transactivation
• Suppression Subtractive Hybridization

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建新基因丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2(HCVFBP2)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVFBP2反式激活相关基因。方法:以HCVFBP2表达质粒pcDNA3.1(-)FBP2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEMTeasy载体连接,构建cDNA消减文库,转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆P...

• 单位
  西安交通大学; 中国人民解放军第302医院; 北京地坛医院