靶向 Ｐｌｋ１基因的 ｓｈＲＮＡ对肝癌 ＢＥＬ７４０２细胞株生物学行为及化疗增敏的影响

作者：郑核; 钟德筃; 何自力; 苗雄鹰; 文宇; 刘威; 陈广

来源：中国现代手术学杂志, 2012, (01): 2-7.

• 肝肿瘤，实验性
• 　ＲＮＡ干扰
• 　长春新碱

目的　利用 ＲＮＡ干扰技术（ＲＮＡｉ），研究表达 Ｐｏｌｏｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ１（Ｐｌｋ１）的短发夹 ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）载体对肝癌细胞株 ＢＥＬ７４０２生物学行为及对化疗药物长春新碱敏感性的影响。　方法　根据靶基因的不同区域构建针对 Ｐｌｋ１ｍＲＮＡ的两组干扰质粒 ｓｈＲＮＡＰｌｋ１：Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ２５１，Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ１３９６以及阴性对照质粒Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡｈｋ，利用电穿孔法转染入肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２，用长春新碱处理细胞后，用ＭＴＴ法检测四组细胞的生长抑制率，计算 ＩＣ５０值，流式细胞仪检测各组细胞凋亡。　结果　半定量 ＲＴＰＣＲ检测 Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ２５１，Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ１３９６组 Ｐｌｋ１ｍＲＮＡ、Ｃｄｃ２５ＣｍＲＮＡ表达较 Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡｈｋ转染组与空白对照组明显下降（Ｐ＜０．０１），ｐ５３ｍＲＮＡ表达增加。长春新碱处理后，Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ２５１组和 Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ１３９６组与 ＢＥＬ７４０２组之间的生长抑制率有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。５μｇ／ｍｌ浓度长春新碱作用２４ｈ后，Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ２５１组和 Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡ１３９６组凋亡指数分别为１９．０９％ ±３．９７％、１９．８０％ ±５．４７％明显高于 Ｐｌｋ１ｓｉＲＮＡｈｋ组和 ＢＥＬ７４０２组 （Ｐ＜０．０１）。结论　成功筛选出两条能特异而高效抑制 Ｐｌｋ１基因表达的 ｓｈＲＮＡ，可以显著抑制 Ｐｌｋ１ｍＲＮＡ、Ｃｄｃ２５ＣｍＲＮＡ及Ｐｌｋ１蛋白的表达，并使 ｐ５３ｍＲＮＡ表达增高，并明显抑制细胞增殖，能增加长春新碱的化疗敏感性，从而为进一步研究该基因的功能和作用机制提供了新的手段。

• 单位
  中南大学湘雅二医院; 邵阳市中心医院