摘要
目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat-6-cfp-10(简称ec)融合基因及其原核表达载体pET-23b(+)-esat-6-cfp-10[以下简称pET-23b(+)-ec],表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10(简称rEC),并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-10编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly_4Ser)_3进行PCR扩增融合。构建TA克隆载体pMD~R 19-T-esat-6-cfp-10(简称pMD~R 19-T-ec),利用PCR、酶切和测序进行鉴定。经限制性内切酶NdeⅠ、XhoⅠ双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b(...
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单位浙江省医学科学院; 杭州市红十字会医院