鸡传染性支气管炎病毒一步法RT-qPCR检测方法的建立

作者：王晓权; 马晓璐; 张东野; 曹祁峰; 李冰^*

来源：现代畜牧兽医, 2022, (07): 1-6.

• 鸡传染性支气管炎病毒
• 一步法实时定量RT-qPCR
• M基因

研究旨在建立一种快速、高效、敏感、特异性强的方法以检测鸡传染性支气管炎病毒。通过比对鸡源传染性支气管炎病毒M基因的保守序列，设计并合成1对特异性引物和1条特异性TaqMan探针；通过优化反应条件，建立检测鸡传染性支气管炎病毒的一步法实时定量RT-qPCR方法。以重组质粒为模板制作标准曲线，并对方法各项指标进行评价。结果显示，该曲线标准曲线方程为：y=-3.442logx+37.614，相关系数R2=0.991；此方法灵敏度较高，最低可检测到1.0×102copies/μL，比普通PCR灵敏100倍；特异性强，与4种常见鸡病毒病无交叉反应，重复性试验组间以及组内变异系数均小于2%。研究表明，此方法操作简便，可直接用作粗提RNA的模板检测，灵敏度高、特异性强、重复性好，可应用于鸡传染性支气管炎病毒早期检测。

• 单位
  辽宁益康生物股份有限公司; 锦州医科大学