重组人α降钙素基因相关肽的克隆与表达(英文)

作者：赵丹丹; 于晓光; 班莺; 徐华锋; 林平; 邹海峰; 刘宇

来源：生命科学研究, 2004, (01): 22-27.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2004.01.005

• haCGRP
• 克隆
• 表达
• 融合蛋白

通过PCR方法从人类基因组中扩增出编码hαCGRP的片段,将该片段定向克隆到pET-32a(+)载体上,构建pET-hαCGRP重组质粒。转化E.coli JM109菌株,利用酶切和测序方法筛选后,经IPTC诱导再转化E.coli BL21trxB(DE3)pLYsS菌株。SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物,最后通过扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验来检测重组hαCGRP扩张血管的活性。结果表明,重组质粒含hαCGRP成熟肽编码基因序列(111bp),符合预想结果;表达出21 kD的融合蛋白,且主要以可溶性形式存在,其粗提物具有扩张血管能力。重组hαCGRP的成功表达为下一步纯化及研制基因工程药物奠定了重要基础。

• 单位
  哈尔滨医科大学