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摘要
目的:为了研究河谷地不容中苄基异喹啉类生物碱生物合成途径的功能基因,从河谷地不容中克隆3个O-甲基转移酶基因,进行生物信息学及原核表达分析。方法:以河谷地不容为材料,采用PCR方法克隆出3个O-甲基转移酶(Si4′OMT、Si6OMT1和Si6OMT2)基因并采用在线工具进行生物信息学分析;采用同源重组技术将3个基因分别构建至原核表达载体进行蛋白表达。结果:同源性和基本理化性质分析结果显示,Si4′OMT形成独立的进化分支,Si6OMT1与来自于Stephania tetrandra S. Moore的St6OMT2聚类成同一个进化分支,Si6OMT2与来源于S.tetrandra的St6OMT4聚类成同一个进化分支;3个O-甲基转移酶中Si6OMT1相对于Si4′OMT和Si6OMT2更稳定。Si4′OMT、Si6OMT1和Si6OMT2在大肠杆菌中均能形成可溶性表达。结论:成功从河谷地不容中克隆出3个O-甲基转移酶基因,并且在大肠杆菌原核表达系统中能实现可溶性表达,为解析河谷地不容中苄基异喹啉类生物碱的生物合成途径及途径中的关键酶积累一定的科学数据。
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