自噬对晚期糖基化终末产物致成纤维细胞损伤的早期保护

作者：韩焱福; 陶然; 孙天骏

来源：中国组织工程研究, 2020, 24(35): 5619-5624.

• 细胞
• 成纤维细胞
• 晚期糖基化终末产物
• 自噬
• N-苯乙酰噻唑
• 氯喹
• 细胞活力
• 免疫
• 创面
• 实验

背景:晚期糖基化终末产物与糖尿病创面难愈合密不可分,晚期糖基化终末产物可影响成纤维细胞增殖及迁移,但自噬在晚期糖基化终末产物致成纤维细胞损伤中的早期保护作用尚未见相关研究。目的:研究晚期糖基化终末产物对成纤维细胞活力及自噬的影响,探讨自噬在成纤维细胞损伤中的早期保护作用。方法:以体外传代培养的人成纤维细胞为研究对象,设立正常对照组(DMEM培养液)、晚期糖基化终末产物组(DMEM培养液+100mg/L晚期糖基化终末产物)、晚期糖基化终末产物抑制剂N-苯乙酰噻唑组(DMEM培养液+100 mg/L晚期糖基化终末产物+100 mg/L N-苯乙酰噻唑)、自噬抑制剂氯喹组(DMEM培养液+100 mg/L晚期糖基化终末产物+10μmol/L氯喹)。培养48 h后,锥虫蓝染色检测各组细胞活力,Western blot法检测LC3及P62蛋白的表达,细胞免疫荧光实验检测自噬体形成,透射电镜观察自噬泡超微结构。结果与结论:(1)细胞死亡率:与正常对照组比较,晚期糖基化终末产物组细胞死亡率显著增加(P <0.01);与晚期糖基化终末产物组比较,N-苯乙酰噻唑组细胞死亡率显著降低(P <0.05),而氯喹组细胞死亡率显著增加(P<0.05);(2)LC3及P62蛋白的表达:与正常对照组相比,晚期糖基化终末产物组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著增加,P62表达显著降低(P<0.01);与晚期糖基化终末产物组相比,N-苯乙酰噻唑组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显下降,P62表达明显上升(P <0.05),而氯喹组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白含量变化不明显(P> 0.05),P62表达明显上升(P <0.05);(3)自噬体形成:晚期糖基化终末产物组和氯喹组均可见细胞中LC3绿色荧光点状聚集物增加;晚期糖基化终末产物组可见数目较多的自噬小体和自噬泡结构,而氯喹组细胞中自噬体结构数量和空泡状结构少于晚期糖基化终末产物组;(4)结果证实,晚期糖基化终末产物可损伤成纤维细胞,降低细胞生存率,早期可激活细胞自噬;诱导的自噬对成纤维细胞损伤起到一定的保护作用。

• 单位
  解放军总医院; 首都医科大学附属北京世纪坛医院