摘要
目的 分析黄芪甲苷抑制HBV复制的宿主调控机制。方法 使用不同浓度的黄芪甲苷处理人正常肝细胞(L-02),根据黄芪甲苷浓度的不同,分为0、5、10和20μg/mL 4组。应用CCK-8检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡,化学发光和生化方法检测AFP、ALT、AST和ALP外泌水平,评估黄芪甲苷对正常细胞的影响。用黄芪甲苷处理携带HBV的肝癌细胞Hep3B,应用qPCR方法检测HBV DNA、pgRNA、MTIF2、RPL10基因表达量,ELISA测法检测HBsAg和HBeAg,评估对HBV复制的影响。应用TCGA和GEO数据库结合R语言资料包对RPL10和MTIF2在临床样本中的预后影响进行分析验证。绘制Kaplan-Meier生存曲线,log-rank检验用于分析比较两组或多组之间的生存差异,进行了time ROC分析以比较RPL10和MTIF2基因的预测准确性和风险评分。计量资料多组间比较和同一组内不同时间段比较均采用单因素方差分析,进一步分析两两组间比较采用 Bonferroni方法。结果 20μg/mL组处理24 h和48 h相较未处理组细胞生长活性均显著提高(P值均<0.05),20μg/mL组处理72 h相较10μg/mL组生长活性提高(P<0.05),5μg/mL组处理72 h相较未处理组生长活性提高(P<0.05)。5、10和20μg/mL3个处理组AFP水平均较未处理组显著增高(P值均<0.05),10和20μg/mL 2个处理组ALT水平分别均较未处理和5μg/mL 2组显著降低(P值均<0.05),20μg/mL组ALT水平较10μg/mL组显著降低(P<0.05)。5、10和20μg/mL 3个处理组AST水平较未处理组均显著增高(P值均<0.05)。5、10和20μg/mL 3个处理组HBV DNA、pgRNA、HBsAg、HBeAg、RPL10和MTIF2水平与未处理组比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。生物信息学分析结果显示, HBV感染的肝癌患者中RPL10和MTIF2基因较高水平表达的患者预后较差,而在无HBV感染的肝癌患者中不存在此现象。结论 黄芪甲苷能够抑制翻译起始蛋白MTIF2和核糖体大亚基成分RPL10,通过调控宿主核糖体翻译开关降低HBV复制。
-
单位成都市第七人民医院; 成都医学院; 成都市郫都区人民医院; 四川省疾病预防控制中心