登革-2型病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法建立

作者：牟小会; 郑祎扬; 韦艳; 颜凤; 程金芝; 吕清巧; 商正玲; 吴家红

来源：中国公共卫生, 2017, 33(07): 1074-1078.

• 登革2型病毒(DENV-2)
• TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
• 检测
• 标准品

目的建立一种针对登革2型病毒(DENV-2)的快速、灵敏、特异的检测方法。方法从Gen Bank下载105株DENV-2病毒毒株全基因序列,应用生物软件Bioedit进行比对分析筛选出保守序列,在保守区域设计特异引物和探针,建立检测DENV-2的TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。结果该方法检测灵敏度达到102copies/μL;特异性验证中除登革2型病毒有明显扩增外,与墨累谷脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、登革病毒1、3、4型、黄热病毒和科萨努尔森林病毒、乙型脑炎病毒均无交叉反应。重复性实验结果表明该方法的组间和组内的变异系数(CV)均<2%。对人工感染DENV-2的87只蚊虫标本进行比对实验,结果荧光定量RT-PCR检测出56份阳性,传统RT-PCR只检测出16份阳性,差异有统计学意义(χ2=37.908,P=0.000)。结论 TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测DENV-2,特异性强、敏感性高。

• 单位
  基础医学院; 公共卫生学院; 贵州医科大学