RNA干扰隐球菌cap10基因的siRNA表达载体的构建与鉴定

作者：肖玉鹏; 苏晓霁; 江凌; 程祖建; 欧启水

来源：临床检验杂志, 2010, 28(05): 358-359.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2010.05.001

• 新生隐球菌
• cap10
• RNA干扰

目的构建cap10基因RNA干扰(RNAi)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,为将其应用于隐球菌的改造及隐球菌性脑膜炎的生物治疗奠定基础。方法根据GenBank发表的cap10基因序列,按照干扰模板设计原则,选择设计1条可形成发夹结构的核苷酸序列,克隆连接到空载体psilencer4.1-CMVneo中构建重组质粒ps4.1neo-cap10并测序鉴定。用LiAc化学法将重组质粒转染新生隐球菌细胞并用G418筛选。比较重组质粒转染前后新生隐球菌cap10基因表达量的变化。结果成功构建针对cap10基因的ps4.1neo-cap10,经测序证实符合预期设计;ps4.1neo-cap10转染组新生隐球菌内cap10基因表达(175534.6±47004.3)copies/μl明显低于空质粒转染组(321995.5±32611.8)copies/μl和空白组(562931.7±65928.4)copies/μl,P<0.05。结论成功构建cap10基因的shRNA表达载体,其可以明显抑制新生隐球菌细胞内cap10基因的表达。

• 单位
  莆田市第一医院; 福建医科大学附属第一医院