人死亡结构域相关蛋白干扰载体的构建与鉴定

作者：余斓; 唐双阳; 申海艳; 伍虹蓉; 朱翠明^*; 万艳平^*

来源：生物技术, 2018, 28(04): 341-371.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.04.0059

• 死亡结构域相关蛋白
• 干扰
• 表达
• 抑制

[目的]构建人死亡结构域相关蛋白(hDaxx)的干扰载体,为研究hDaxx在HPV致宫颈癌发生与发展过程中的作用提供实验基础。[方法]以hDaxx全基因序列为模板,设计hDaxx RNA干扰引物并扩增干扰片段,将其连接到pGPU6/GFP/Neo真核表达载体,构建pGPU6/GFP/Neo-SiDaxx干扰载体,转染至HeLa细胞,利用荧光显微镜观察转染效率以及通过RT-PCR、Western Blot检测siRNA对HeLa细胞中hDaxx表达的影响。[结果]在转染了pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx载体的HeLa细胞中,其hDaxx mRNA和蛋白的表达水平与空载体对照组比较明显降低。[结论]成功构建了hDaxx的干扰载体pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx,该干扰载体能抑制HeLa细胞中hDaxx mRNA基因和蛋白的表达。

• 单位
  南华大学