免疫磁珠捕获联合PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法学研究

作者：**; 龚玉华; 钱彩娣; 孙春红; 周丽萍; 傅行礼; 邵启祥

来源：国际检验医学杂志, 2014, 35(21): 2931-2933.

• 结核分枝杆菌
• 免疫磁珠捕获
• 双内标
• PCR-ELISA

目的采用免疫磁珠捕获(IMC)联合双内标PCR-ELISA(IMC-PCR-ELISA)技术,建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠(Dynabeads)。并根据结核分枝杆菌Mtp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列,设计2对特异性引物(上游引物的5′端用生物素修饰),以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段(其与扩增模板在引物区的序列相同)和3套捕获探针(3′端用地高辛标记)。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌,再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌,全过程约4h,检测限为5×103 copies/mL,当低内标模板浓度在3070copies/mL,高内标模板浓度在8 00012 000copies/mL时,计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系(r2=0.998),未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法,此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。

• 单位
  江苏大学; 镇江市第二人民医院; 镇江市第三人民医院