牛病毒性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作者：王亚新; 陈萌萌; 王露; 李欣; 赵洪哲; 温永俊; 王凤雪^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-10.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230324.001

• 牛病毒性腹泻病毒
• TaqMan荧光定量PCR
• 5’UTR

为建立一种针对牛病毒性腹泻病毒的检测方法，本研究针对牛病毒性腹泻病毒的5’UTR设计特异性引物及TaqMan探针，进行扩增，进而构建阳性重组质粒。经过条件优化建立了牛病毒性腹泻病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示，建立的实时荧光定量PCR检测方法在阳性标准质粒拷贝数在1×104～1×108拷贝/μL时线性关系良好，线性相关系数R2=0.998。该方法最低检测限为10拷贝/μL；可以特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，与牛冠状病毒(BCV)、牛轮状病毒(BRV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、以及牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)不发生交叉反应，病毒滴度与拷贝数线性关系良好，线性相关系数R2=0.997；与商品检测化试剂盒的符合率为97.5%。该方法为牛病毒性腹泻病毒的早期快速诊断提供了有力的技术支持。

• 单位
  内蒙古农业大学