利用免疫蛋白质组学鉴定炭疽杆菌蛋白MetK及其免疫原性验证

作者：童超; 刘先凯; 任静晓; 王东澍; 高志奇; 冯尔玲; 朱力; 廖祥儒; 王恒樑

来源：军事医学, 2012, 36(02): 115-119.

• 免疫蛋白质组学
• metK
• 芽孢杆菌,炭疽
• 基因表达
• 多克隆抗体

目的验证免疫蛋白质组中鉴定到的S-腺苷甲硫氨酸MetK蛋白的免疫原性。方法免疫蛋白质组学的方法鉴定到MetK蛋白,通过PCR方法扩增metK基因全长,然后将其克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌DH5α,测序正确后提取质粒转入BL21(DE3)中进行诱导表达。再通过Ni-NTA柱纯化MetK蛋白,纯化后的蛋白免疫SPF级的BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,通过多克隆抗体与炭疽芽孢杆菌A16R全菌蛋白Western印迹检测,验证MetK蛋白的免疫原性。结果与结论成功表达了MetK蛋白,制备了其多克隆抗体,为免疫蛋白质组学鉴定到的蛋白点进行验证,也为研究MetK蛋白的生物学功能研究提供了条件。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 军事医学科学院; 江南大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室