构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响

作者：刘逸之; 赵新汉; 吕卫东; 常柏玲

来源：中国组织工程研究, 2016, 20(49): 7425-7430.

• 乳腺肿瘤
• 细胞凋亡
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• 基因治疗
• 人血清白蛋白
• 载体
• 细胞转染
• 体外培养
• 陕西省自然科学基金

背景:凋亡素(Apoptin)能诱导50种以上不同类型的肿瘤细胞凋亡,有望成为一种极具应用前景的抗肿瘤制剂。如何安全、有效地将其应用于临床,是一个亟待解决的最具现实意义的问题。目的:拟制备人血清白蛋白(HSA)与Apoptin基因的复合物,通过体内外实验验证其抗瘤效果,为Apoptin尽早应用于基因治疗寻找一个简单有效的转移方式。方法:(1)构建含Apoptin基因的真核表达载体pcD NA-Apoptin。以水溶性碳二亚胺(EDC)为交联剂,将聚醚酰亚胺(PEI)与人血清白蛋白(HSA)连接,合成HSA-PEI复合物,然后经电荷中和效应将HSA-PEI复合物与pcD NA-Apoptin重组体及pcD NA空载体分别连接,形成相应HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物;(2)将HSA-PEI-pcD NA-Apoptin复合物转染乳腺癌MCF-7细胞,Western blot检测Apoptin基因在细胞中的表达,MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖情况;(3)建立裸鼠乳腺癌模型,使用尾静脉注射法,分别将0.5 mL HSA-PEI-pcD NA-Apoptin、HSA-PEI-pcD NA及生理盐水注射入裸鼠体内,4周后测量肿瘤体积。结果与结论:(1)成功构建并鉴定了HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物,体外成功转染乳腺癌MCF-7细胞;(2)HSA-PEI-pcDNA-Apoptin转染MCF-7细胞24 h有Apoptin蛋白的表达,而转染HSA-PEI-pcD NA细胞及空白对照组细胞未见Apoptin蛋白的表达;(3)体外细胞增殖实验提示HSA-PEI-pcD NA-Apoptin组吸光度值明显低于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P<0.05);(4)裸鼠乳腺癌模型HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组肿瘤体积小于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P<0.05);(5)结果表明,HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物有明显的抑制肿瘤作用。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院; 陕西省肿瘤医院