建立并评价基于LC-MS/MS同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法

作者：邹雨桐; 马晓丽; 禹松林; 李倩倩; **晨; 钟健; 毛晨晖; 高晶; 邱玲^*

来源：中华检验医学杂志, 2023, 46(08): 814-821.

DOI：10.3760/cma.j.cn114452-20230210-00085

• 色谱法, 液相
• 串联质谱法
• β-淀粉样蛋白
• 脑脊液

目的建立并验证一种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法, 并评价该方法与3种主流检测方法间的一致性。方法方法建立、验证与一致性评价。以15N标记的β-淀粉样蛋白作为内标, 采用Waters MCX 96孔固相萃取板进行抽提和萃取, 收集洗脱液至QuanRecovery MaxPeak 700 μl收集板。在正离子模式下, 基于电喷雾离子化的多反应监测模式实现脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的同时测定。参考CLSI C62-A和EP-15A3指南对定量限、线性、回收率、精密度、正确度等性能进行方法学评价。收集57例临床检测剩余的脑脊液样本, 采用INNOTEST ELISA试剂盒及Lumipulse G和Roche Elecsys全自动化学发光检测系统测定Aβ1-42和Aβ1-40的浓度, 采用Passing-Bablok和Bland-Altman法进行不同检测系统间的比对及偏倚评估。结果该方法的分析时长为8 min, 测定Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的定量限分别为0.1、0.5、0.1 ng/ml, 线性范围可覆盖临床实际样本浓度分布;回收率分别为86.2%～93.8%、100.9%～103.9%和103.3%～107.1%;总不精密度分别为4.7%～7.4%、3.5%～4.6%和5.2%～10.9%;Aβ1-42有证参考物质的测定值均在允许不确定度的范围内;携带污染率均≤0.11%。此外, 基于该LC-MS/MS法测定的脑脊液Aβ1-42和Aβ1-40的结果与基于INNOTEST ELISA方法和Lumipulse G及Roche Elecsys全自动生化分析仪检测的结果相关性较好, 相关系数r为0.920～0.970, 但测定值间存在明显不同。结论本研究建立了一种基于LC-MS/MS同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法, 该方法准确、简便, 可应用于临床检测。质谱法检测Aβ1-42和Aβ1-40, 特别是Aβ1-42, 与其他检测系统间的相关性较好但测定值存在显著差异, 提示阿尔茨海默症经典标志物检测的一致化和标准化有待改进。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医院