miR-135a-5p靶向抑制Kif3B调控小鼠腭胚突间充质细胞的自噬

作者：冯文宣; 廉舒博; 王哲; 陈靖; 何苇^*

来源：中国组织工程研究, 2024, 28(19): 3003-3011.

• 自噬
• 胚胎腭突间充质细胞
• miRNA
• KIF3B
• Shh信号通路
• 腭裂

背景：研究表明，在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达，初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。目的：探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。方法：体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转染分别设置为：(1)对照组、miR-135a-5p阴性对照组、miR-135a-5p模拟物组。(2)NC+miR-NC组、KIF3B过表达组、miR-135a-5p+KIF3B组。qRT-PCR验证miR-135a-5p、KIF3B的转染效率；透射电镜观察各组细胞中自噬小体/自噬溶酶体的数目；免疫荧光技术测定自噬标记物LC3B的荧光表达程度；Western blot检测KIF3B、LC3和P62的蛋白表达。(3)miR-135a-5p阴性对照组、SAG处理组、SAG+miR-135a-5p组。qRT-PCR检测Shh信号下游关键转录因子Gli3的mRNA表达水平；Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的蛋白表达。结果与结论：(1)过表达miR-135a-5p后，细胞内自噬小体/自噬溶酶体数量显著增多(P <0.01);LC3B的荧光密度显著升高(P <0.01),KIF3B、P62的蛋白表达降低(P <0.01),LC3的蛋白表达升高；(2)过表达KIF3B后，细胞内自噬小体/自噬溶酶体数目明显减少(P <0.01),LC3B的荧光密度降低(P <0.01),P62的蛋白表达升高(P <0.01),LC3的蛋白表达下降(P <0.01);miR-135a-5p靶向抑制KIF3B的表达(P <0.01)，并使自噬小体/自噬溶酶体数目、LC3B的荧光强度以及LC3的蛋白表达得到回升(P <0.01),P62的蛋白表达下降(P <0.01)；(3)SAG使Gli3的mRNA表达明显升高(P <0.01),P62的蛋白表达升高(P <0.01),LC3的蛋白表达下降(P <0.01)；加入miR-135a-5p后，Gli3的mRNA表达显著下降(P <0.01),P62的蛋白表达下降(P <0.01),LC3的蛋白表达回升(P <0.01)；(4)结果表明：miR-135a-5p靶向抑制KIF3B并且可能通过负向调控Shh信号通路促进小鼠胚胎间充质细胞自噬。

• 单位
  遵义医科大学