疥螨eIF4E和UPP基因的克隆表达及免疫鉴定

作者：张倩; 徐路阳; 郭茂川; 李晓萍; 李敏; 何冉^*

来源：中国人兽共患病学报, 2023, 39(05): 433-439.

• 疥螨
• 真核翻译起始因子
• 尿苷磷酸化酶
• 克隆表达
• 免疫原性

目的 克隆、表达疥螨(Sarcoptes scabiei,S.scabiei)真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)和尿苷磷酸化酶(Uridine phosphorylase, UPP),并鉴定其免疫原性。方法 首先提取兔疥螨总RNA,通过反转录聚合酶链式反应得到cDNA,根据NCBI数据库eIF4E和UPP序列设计引物，PCR扩增获得疥螨eIF4E、UPP完整基因序列，对基因序列进行生物信息学分析，构建pET-32a(+)重组质粒，SDS-PAGE验证重组蛋白表达情况，最后免疫印迹法鉴定其免疫原性。结果 疥螨eIF4E基因的开放阅读框(ORF)长度约为561 bp,编码186个氨基酸，疥螨UPP基因的ORF长度约为939 bp,编码312个氨基酸。与其他物种氨基酸序列比对显示，eIF4E、UPP氨基酸序列与粉尘螨、屋尘螨、热带无爪螨亲缘关系较近，进化树分析eIF4E、UPP氨基酸序列与节肢类动物在同一分支。同时，成功诱导表达了疥螨重组eIF4E和UPP蛋白，免疫印迹结果表明重组eIF4E和UPP蛋白可与自然感染疥螨的兔血清结合，具有较好的免疫原性。结论 疥螨重组eIF4E和UPP蛋白均具有较好的免疫原性。

• 单位
  四川农业大学