siRNA沉默POLE2基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖的影响

作者：李娜苗; 张莹莹; 范亚莉; 赵钰玲; 董娅; 白洁; 李建英^*

来源：现代肿瘤医学, 2019, 27(01): 35-40.

• 慢病毒转染
• 基因
• 非小细胞肺癌
• RNA干扰

目的:构建DNA聚合酶εB亚基(POLE2)基因重组慢病毒载体,并检测其在非小细胞肺癌(NSCLC)中的功能。方法:RT-PCR技术检测POLE2基因在A549、NCI-H1975、NCI-H1299细胞中的表达。设计并合成针对POLE2 siRNA靶序列的寡核苷酸单链,退火、酶切后产生GV115-shP OLE2慢病毒载体。该载体含有绿色荧光蛋白(GFR),经聚合酶链式反应(PCR)筛选出阳性克隆并测序鉴定。将GV115-shP OLE2、Helper1. 0、Helper2. 0质粒共感染包装293T细胞,包装成假病毒颗粒并感染非小细胞肺癌A549细胞,经免疫印迹法(Western blot)检测筛选POLE2 siRNA有效靶点,从而进行细胞功能学实验。CCK-8法检测POLE2基因沉默对于细胞增殖能力的影响;克隆形成实验检测POLE2基因沉默对细胞克隆形成能力的影响; Casepase3/7检测POLE2基因沉默对细胞凋亡的影响。结果:RT-PCR结果证实POLE2基因在三株细胞中表达丰度均为高表达。PCR和测序结果显示,GV115-shP OLE2慢病毒载体构建正确,经Western blot法证明POLE2 siRNA对于POLE2的外源表达有明显沉默作用,是有效靶点。慢病毒转染A549细胞后细胞增殖明显减缓,细胞克隆数减少,凋亡细胞数增多,与转染阴性对照病毒的A549细胞组相比,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:RNAi技术沉默POLE2基因表达后,POLE2 siRNA明显抑制了非小细胞肺癌细胞的增殖。

• 单位
  西安市中心医院; 西安交通大学; 延安大学