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摘要
利用CRISPRi技术构建靶向MRP1的干扰载体，采用生物信息学分析MRP1的启动子序列，设计并合成3对sgRNA干扰片段，构建3种靶向MRP1的干扰表达载体，分别转染A549和A549/DDP细胞后，通过q RT-PCR和Western blot方法检测MRP1 mRNA和蛋白的表达情况，MTT法检测细胞对川楝素的敏感性，激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态学变化．结果表明，基因测序证实成功构建了3种干扰载体，分别转染干扰载体至A549/DDP细胞48 h后MRP1 RNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01），其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好；将sgRNA-MRP1-2转染并使用60 nmol/L川楝素处理后，细胞对川楝素的敏感性显著增加，IC50值显著降低（P<0.01），细胞形态由梭形变为椭圆形，染色质高度凝聚、边缘化．
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