miR-199a-5p和miR-206靶向调控SULF1并抑制卵巢上皮细胞对顺铂的敏感性

作者：孙泽恩; 刘玉洁; 欧阳倩颖; 刘英姿; 曾飞跃^*

来源：肿瘤药学, 2022, 12(04): 472-480.

• SULF1
• miR-199a-5p
• miR-206
• 顺铂敏感性

目的 SULF1是硫酸酯酶家族成员之一，主要发挥肿瘤抑制因子的作用，在多种肿瘤中低表达，本研究旨在筛选直接靶向SULF1的microRNAs，并验证候选microRNAs对SULF1表达的负调控作用。方法 利用TargetScanHuman 7.2、miRDB、DIANA和RNAhybrid数据库预测调控SULF1的microRNAs。利用实时荧光定量PCR和Western blotting实验探索microRNAs对SULF1表达的影响。双荧光素酶报告基因实验探究microRNAs和SULF1基因的直接结合能力。CCK-8实验验证microRNAs对铂类药物敏感性的影响。结果 利用数据库预测到两个microRNAs:miR-199a-5p和miR-206，二者均可靶向SULF1的3’-UTR区域。实时荧光定量PCR结果显示，与IOSE80细胞中的阴性对照相比，miR-199a-5p和miR-206对应的模拟物(mimics)分别使SULF1的mRNA表达水平降低至23.07%和20.11%，而它们的抑制剂(inhibitors)则分别使SULF1的mRNA表达水平升高3.62倍和3.09倍。Western blotting结果表明，miR-199a-5p和miR-206也可降低SULF1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验表明，miR-206和miR-199a-5p均可直接结合SULF1的3’-UTR，且miR-206具有更强的调控作用。CCK-8实验结果表明，降低miR-199a-5p和miR-206的表达水平可显著增强IOSE80细胞对顺铂的敏感性(IC50:9.287μmol·L-1/11.32μmol·L-1vs. 16.75μmol·L-1)，相反，二者过表达可显著降低IOSE80细胞对顺铂的敏感性。结论 miR-199a-5p和miR-206均可直接与SULF1的3’-UTR结合，下调SULF1表达，降低卵巢细胞对顺铂的敏感性。

• 单位
  中南大学湘雅医院; 中南大学