过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能

作者：田蓉; 刘秋慧; 蔡萌; 李静; 王菁; 肖伟; 罗燕

来源：中山大学学报(医学科学版), 2014, 35(05): 695-701.

DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2014.0115

• 人视网膜血管内皮细胞
• Claudin-5
• 紧密连接
• 屏障功能
• 慢病毒转染

【目的】探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响。【方法】体外原代培养人视网膜血管内皮细胞(hRVEC)。当接种至transwell膜的P2P5代hRVEC近60%融合时进行慢病毒介导的转染实验。hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组。荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率。Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平。CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性。待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻(TER),异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性。【结果】慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60%,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加。CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER。【结论】过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路。

• 单位
  眼科学国家重点实验室; 中山大学中山眼科中心