hIAPP与麦芽糖结合蛋白的融合表达、纯化和鉴定

作者：尚金召; 王雪芹; 熊聿力; 路福平; 刘夫锋^*

来源：天津科技大学学报, 2019, 34(06): 25-41.

DOI：10.13364/j.issn.1672-6510.20180200

• 人胰岛淀粉样多肽
• 麦芽糖结合蛋白
• 融合表达
• 纯化
• 鉴定

基于人胰岛淀粉样多肽(h IAPP)的氨基酸序列,按照大肠杆菌(E.coli)密码子偏好性合成基因,并克隆到pMAL-c2x载体中,与MBP蛋白mal E基因融合表达,获得重组表达质粒pMAL-hIAPP.将质粒pMAL-hIAPP转化到表达宿主E. coli BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白MBP-hIAPP表达.SDS-PAGE电泳显示融合蛋白MBP-hIAPP的相对分子质量约为4.9×104.利用重组型烟草蚀纹病毒的半胱氨酸蛋白酶(rTEV)酶切MBP-hIAPP,并采用凝胶过滤层析的方法分离出高纯度的hIAPP,利用MALDI-TOF质谱进行了验证.

• 单位
  天津科技大学; 工业酶国家工程实验室; 工业发酵微生物教育部重点实验室; 生物工程学院