副溶血弧菌QsvR ChIP-qPCR方法的建立

作者：张苗苗; 李雪; 陆仁飞; 张义全^*; 周敏^*

来源：江苏大学学报(医学版), 2023, 33(06): 516-527.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y230082

• ChIP-qPCR
• 蛋白质-DNA复合物
• 副溶血弧菌
• QsvR

目的:建立副溶血弧菌QsvR的染色质免疫共沉淀-实时定量PCR(ChIP-qPCR)实验方法。方法:通过热激转化和转化结合将标记2×Flag标签的qsvR片段转入qsvR突变株(ΔqsvR)中，阿拉伯糖诱导表达QsvR-2×Flag蛋白，通过甲醛与基因组DNA进行交联形成2×Flag-QsvR-DNA复合物，将基因组DNA超声裂解为100～1 000 bp大小不等的片段，通过特异性抗原抗体反应将蛋白质-DNA复合物沉淀下来，高盐和加热解交联，回收DNA进行qPCR定量DNA,分析副溶血弧菌体内QsvR与靶基因的结合情况。结果:成功构建出实验菌株ΔqsvR/pBAD33-qsvR-2×Flag,以不加阿拉伯糖诱导为对照，经阿拉伯糖诱导菌株的aphA、opaR、exsB和vtrA的免疫共沉淀量明显较高，表明在副溶血弧菌体内QsvR与aphA、opaR、exsB和vtrA具有结合作用。结论:成功建立了副溶血弧菌QsvR的ChIP-qPCR实验方法，可用于原核生物体内蛋白质-DNA相互作用的研究。

• 单位
  南通大学; 南通市疾病预防控制中心; 江苏大学