GA结合蛋白转录因子亚基β1的反义RNA对过氧化氢诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响

作者：马迎辉; 潘冬梅^*; 叶继业; 胡骁

来源：心脑血管病防治, 2023, 23(04): 4-10.

• 脑微血管内皮细胞
• GA结合蛋白转录因子亚基β1的反义RNA
• miR-101-3p
• 细胞凋亡
• 氧化应激
• 炎症

目的 探讨GA结合蛋白转录因子亚基β1的反义RNA(GABPB1-AS1)对过氧化氢（H2O2）诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养大鼠脑微血管内皮细胞，分为对照（Con）组、模型（Model）组、A组（Model加用si-NC）、B组（Model加用si-GABPB1-AS1）、C组（Model加用si-GABPB1-AS1及anti-miR-NC）和D组（Model加用si-GABPB1-AS1及anti-miR-101-3p）。RT-qPCR检测细胞中GABPB1-AS1和miR-101-3p表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，Western Blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白（Bax）、活化的半胱天冬酶3(Cleaved-caspase 3)和活化的半胱天冬酶9(Cleaved-caspase 9)蛋白表达，试剂盒检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证GABPB1-AS1和miR-101-3p靶向调控关系。结果 Con组、Model组、A组及B组GABPB1-AS1、miR-101-3p、细胞凋亡率、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9、MDA、SOD、IL-1β和TNF-α水平差异均有统计学意义（F=724.541、450.866、368.481、154.595、107.850、103.824、62.514、371.871、210.219、1 726.871、488.217,P <0.05）。与Con组比较，Model组细胞中GABPB1-AS1表达升高，miR-101-3p表达降低，细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平升高（P <0.05）,Bcl-2蛋白水平和SOD活性降低（P <0.05）。与A组和Model组比较，B组GABPB1-AS1表达、细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平降低，miR-101-3p表达、Bcl-2蛋白水平和SOD活性升高（P <0.05）。GABPB1-AS1靶向负调控miR-101-3p表达。与C组比较，D组细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平升高（t=13.360、9.779、5.644、5.156、13.545、37.810、25.132,P <0.05）,Bcl-2蛋白水平和SOD活性降低（t=9.311、12.752,P <0.05）。结论 干扰GABPB1-AS1可能通过上调miR-101-3p表达抑制H2O2诱导的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡、氧化应激反应及炎症因子表达。