在表达HCV Core蛋白的肝癌细胞中建立Notch1低表达稳定转染细胞株

作者：赵林莉; 李卓; 陈石蕊; 姚敏; 秦岭; 党品香; 高欢; 吕欣

来源：微生物学免疫学进展, 2017, 45(06): 50-55.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2017.06.008

• Notch1
• 丙型肝炎病毒
• 肝癌细胞株
• 慢病毒
• 干扰

目的筛选并包装Notch1基因shRNA低表达的慢病毒,感染稳定表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白(core)的肝癌细胞,在此基础上建立低表达Notch1基因的SMMC7721-Core稳定转染细胞株。方法设计针对Notch1基因mRNA的干扰序列,并将其连接入载体质粒,转染HEK293T细胞,构建带有Notch1基因的慢病毒表达载体,感染稳定表达HCV Core蛋白的人肝癌细胞株SMMC7721-Core,采用定量聚合酶链反应(quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测干扰效果。结果构建了带有干扰Notch1基因的慢病毒表达载体,感染SMMC7721-Core细胞后筛选获得稳转细胞株,qPCR测得Notch1 mRNA低表达,Western blot检测到Notch1蛋白低表达。结论成功构建了Notch1低表达SMMC7721-Core人肝癌稳定转染细胞株,为进一步开展对HCV Core蛋白诱导肝癌过程中Notch1所起作用的研究提供了依据。

• 单位
  第四军医大学