羊驼非免疫重链单域抗体库的构建和鉴定

作者：吴标; 王树军; 夏立亮; 季萍; 葛海良; 赵国屏; 王颖

来源：现代免疫学, 2011, (05): 353-357.

• 重链单域抗体
• 非免疫抗体库
• 噬菌体展示
• 羊驼 heavy chain antibody
• non-immune VHH antibody library
• phage display
• Llama

本研究旨在通过构建羊驼非免疫重链单域抗体库,完成抗体库多样性的鉴定,为进一步筛选抗原特异性重链抗体奠定基础。我们从未经免疫的羊驼外周血中分离外周血单个核细胞(PBMC),抽提RNA后,用RT-PCR方法特异性扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)片段;并采用两步连接方法将重链抗体可变区片段与噬菌粒载体pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠杆菌TG1后获得VHH抗体基因库;并采用稀释计数法测定抗体库库容量,随机挑取克隆测序验证抗体库多样性。结果显示,我们所构建的羊驼非免疫重链单域抗体库的库容量为1.5×109,随机克隆测序验证多样性良好,独立克隆所占比例为80%,并显示出和人源抗体较高的...

• 单位
  上海人类基因组研究中心; 上海市免疫学研究所; 上海交通大学