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摘要
目的探讨特利加压素(TP)对创伤脓毒症小鼠血压和生存的保护作用及其机制。方法①生存实验:取120只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用创伤失血(双后肢骨折+眼眶放血45%)8 h后进行盲肠结扎穿孔术(CLP)的方法构建创伤脓毒症小鼠模型;腹腔注射TP进行干预。60只模型小鼠用于观察0.05μg/g TP在不同干预时间(分为创伤失血后立即给药+6 h后重复给药、创伤失血后立即给药+每隔6 h重复给药直至实验结束、CLP后4 h给药+每隔6 h重复给药直至实验结束3个时间点)对创伤脓毒症小鼠48 h累积生存率的影响,寻找TP的最佳干预时间。另外60只模型小鼠用于观察在最佳干预时间给予不同TP剂量(0.01、0.05、0.25μg/g)对创伤脓毒症小鼠48 h累积生存率的影响,寻找TP的最佳干预剂量。②干预实验:另取45只小鼠,按随机数字表法分为创伤失血+假手术组(TH+Sham组,只开腹、不进行CLP)、TH+CLP组和TH+CLP+TP组(采用生存实验中TP最佳干预时间和剂量),每组15只。各组持续监测小鼠平均动脉压(MAP),并分别于模型制备成功后2 h收集眼眶全血,12 h和24 h取肺组织。光镜下观察肺组织病理形态学改变;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和肺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺组织中IL-1β和TNF-α的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定肺组织胞核与胞质内核转录因子-κp65(NF-κB p65)的蛋白表达。结果 ①生存实验结果显示:采用创伤失血后立即腹腔注射TP 0.05μg/g且每隔6 h重复给药的持续给药方式,小鼠48 h累积生存率最高,为最佳干预方式。②干预实验结果显示:创伤脓毒症制模成功后12 h小鼠肺组织即出现肺泡壁断裂,并伴有炎性细胞浸润,且随时间延长病理损害逐渐加重。创伤失血后小鼠MAP迅速下降,给予CLP二次打击后MAP进一步下降。TH+CLP组血清和肺组织IL-1β、TNF-α含量及其肺组织mRNA表达,以及胞质和胞核内NF-κB p65蛋白表达均较TH+Sham组明显升高。与TH+CLP组比较,给予TP干预后,肺组织病理学改变明显改善,MAP下降趋于平缓,可明显降低血清炎性介质水平[IL-1β(pg/L):164.32±25.25比233.11±23.02,TNF-α(pg/L):155.56±31.47比596.38±91.50,均P<0.05],抑制肺组织中炎性细胞因子的表达[IL-1β含量(ng/mg):262.68±16.56比408.15±17.85,IL-1βmRNA(2-△△Ct):2.63±0.68比6.22±0.74,TNF-α含量(ng/mg):311.07±17.35比405.04±24.83,TNF-αmRNA(2-△△Ct):2.04±0.62比5.32±0.55,均P<0.01],下调NF-κBp65的蛋白表达[胞质(灰度值):0.47±0.01比1.28±0.05,胞核(灰度值):0.45±0.02比1.95±0.06,均P<0.01]。结论采用创伤失血后立即腹腔注射TP 0.05μg/g且每隔6 h重复给药的持续给药方式,能提高创伤脓毒症小鼠MAP,改善预后,其机制可能与减轻炎症反应,抑制肺组织细胞NF-κB信号通路激活有关。
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