科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
为获得牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）gI蛋白单克隆抗体，构建了gI截短基因重组原核表达质粒pET-32a-gI，并对其进行了诱导表达和纯化，通过SDS-PAGE和Western blot验证了gI蛋白在大肠杆菌内的表达情况。将纯化的gI蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合、筛选及亚克隆，得到针对IBRV gI蛋白的单克隆细胞株gI14。利用体内诱生法制备抗IBRV gI蛋白单克隆抗体腹水，使用Western blot和间接免疫荧光（IFA）对单克隆抗体特异性进行检测和验证。Western blot结果显示：原核表达的gI融合蛋白相对分子质量为34 ku,gI蛋白单克隆抗体与gI表达蛋白反应性良好，与pET-32a（+）空载体蛋白无特异性结合；天然表达的gI蛋白相对分子质量为45 ku,gI蛋白单克隆抗体与细胞内感染的IBRV所表达的gI蛋白反应性良好。IFA结果显示，gI蛋白单克隆抗体及阳性对照组IBRV多抗均能与细胞内感染的IBRV发生特异性结合，使细胞出现特异性绿色荧光信号，而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。结果表明，本研究基于高效表达的gI蛋白，成功制备了1株能稳定表达gI单克隆抗体的细胞株gI14，获得的gI蛋白单克隆抗体与原核表达的gI蛋白及IBRV全病毒均能特异性结合，这为进一步研制IBRV诊断试剂盒及探究IBRV gI蛋白抗原表位及蛋白功能奠定了基础。
- 单位
