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摘要
目的获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原, 并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法人工合成密码子优化的 GTV-NP 编码基因, 克隆至 pET32a(+)载体, 构建重组表达质粒, 转化至 BL21(DE3)。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原, 建立并优化GTV IgG抗体间接ELISA检测方法, 并对其进行评价和初步应用。结果成功构建原核表达质粒pET32a-NP, 重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达, 大小约为44 kD, Western blot结果表明重组蛋白与GTV阳性血清具有良好的抗原性。建立的ELISA法特异性强、敏感性高、批内和批间的变异系数均小于10%具有较好的重复性;检测结果与IFA检测结果符合率达到92.77%。结论建立的GTV NP 抗体检测ELISA方法的敏感性、重复性和特异性均较好。
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单位中国科学院武汉病毒研究所; 华中科技大学同济医学院附属协和医院; 新疆疾病预防控制中心
